桉樹組培技術詳細說明組織培養指以分離出植物各部分的組織，如分生組織、形成層、木質部、韌皮部、表皮、皮層、胚乳組織、髓部等或已誘導的愈傷組織為外植體的離體無菌培養。桉樹組織培養研究始于60年代，據報道，有20多種桉樹可通過植株的不同部分，種子、下胚軸、幼苗的根、莖段、葉柄、葉片、莖尖、結節、花藥、樹皮外植體和花粉粒等。通過組織培養形成愈傷組織，目前，桉樹組織培養發展很快，已解決了連續培養小植株的器官發生，試管苗的移栽和移栽后生長等一系列關鍵技術問題。

桉樹組培獲得成功，主要解決了一些難以生根的樹種或無法采用扦插方法增繁無性系的繁殖問題，加快優良無性系化的繁殖速度，同時無性系組培苗可直接上山造林，但組培技術操作要求嚴格，采用無菌操作，且成本較高，對大面積造林來說不利于產出的經濟效益，因此目前生產單位通常使用組培方法培育扦插母株作為扦插擴大材料，然后通過扦插繁殖生產大量苗木營建速生豐產林與諸如嫁接苗芽條和萌芽條等相比，組培苗芽條的幼態化最佳，有分生機能的薄壁細胞活躍、再生能力比較強、扦插更容易生根成活。 

一實驗室設備及其操作 

桉樹組織培養是一項技術性很強的工作，無菌條件要求嚴格，對實驗室設備及人員的操作技術要求較高，組培實驗室應配備下列設備。 

第一洗滌設備、設置洗滌室、洗滌劑及各種洗滌工具 

第二滅菌設備、設置高壓高溫滅菌鍋、烘箱等 

第三化學實驗設備、設置實驗臺架、藥品柜、冰箱、離心機、天平、各種、玻璃器皿、PH計、攪拌器、蒸餾器等 

第四無菌操作設備、設置無菌室、超凈臺、接種箱、超凈室及接種工具、鑷子、剪刀、解剖刀、接種鏟及酒精燈等 

第五培養設備、設置培養箱室、培養容器、三角瓶、試管、罐頭瓶等 

二培養基及其附加成分 

植物組織培養應用的培養基，一般都包括大量元素、微量元素和碳水化合物，并添加各種各樣的附加物，如維生素、氨基酸、生長素、細胞分裂素等。 

桉樹芽的誘導可選用White、B5H、N6、和MS等作基本培養基、胚狀體的誘導可選用B5H及改良H等作基本培養基。 

三桉樹組培技術 

桉樹組織培養技術通常有兩種方法一是取植株嫩莖段或不定芽接種培養形成愈傷組織分化長成完整植株二是取無菌種子或無茵發芽后的苗段誘導胚狀體。 

生長成完整植株。 

1愈傷組織形成和分化 

1外植體的采集 

采集對象為嫁接苗或伐樁、環割、萌芽條、截取具有半木質化程度的嫩梢長度為5~10cm試驗證明，3~5月份桉樹萌芽率較高，莖部積累有較豐富的營養物質和內源激素，受病蟲侵害較少、外植體誘導成功率最高，7~9月份屬高溫高濕季節，水分、溫度都較高、病蟲十分活躍、莖段機械損傷較多、易受病、蟲菌的侵害污染，誘導成功率最低，因此外植體采集最好是在春季進行，以芽條腋芽開始膨大，芽鱗片還未裂開時為最佳時機，芽條在植株上的部位也是誘導芽能否成功的重要因素，試驗證明，萌芽條中上部的莖段，第5~第7節最好，（中下部第8~第10節）莖段木質化程度較好。芽不易萌動、易褐化、梢部因芽組織幼嫩、消毒時易被殺傷、褐化嚴重，另外，枝條修剪萌發的枝條，且用抗菌素溶液和殺菌劑預處理后誘導效果也不錯。 

2外植體消毒 

將采回的桉樹嫩莖段剪去葉片，用自來水洗干凈，在無菌條件下用70%酒精浸泡10秒鐘，再用新潔爾滅溶液或0.1升汞溶液浸5~6分鐘消毒，用無菌水沖洗4~5次，然后切取含1~2個腋芽的莖段接種在培養基上進行誘導培養，試驗證明，重復消毒一次效果更佳。 

3褐變及其預防 

桉樹莖段接種后，如切口處產生褐色滲出物，使莖段周圍的培養基變成棕褐色，莖段在培養基內的基部變褐色就會失去生命力，導致外植體死亡、嚴重地影響了外植體誘導的成功率，可采取以下措施綜合防治。盡量避免組織傷害，用于切割的解剖刀應盡可能鋒利，切割外植體時，把組織浸于水中隔絕空氣、切面要垂直、切口的損傷要減至最低的限度，接種時選擇表面消毒過程中沒有損傷的莖段，注意不讓腋芽附著培養基，利用漫射光培養，由于光能提高多氧化酶的活性，從而促進多酚化合物的氧化，因此在弱光下培養，能有效地降低多酚氧化物的氧化。及時轉移培養基，當發生褐變時應及時轉移培養基，使褐化不影響腋芽周 

圍的組織，外植體仍有萌動的生命力。 

4芽的誘導 

將含有腋芽的莖段接種在1/2MS+0.5mg/LBA+1mg/LIBA的培養基上，在26下進行誘導培養，經20~30天培養，可形成肉眼可見的愈傷組織，誘導率達95%以上，愈傷組織多發生在切口處、呈顆粒狀、緊密、也可發生在非切口處、呈瘤狀、疏松。 

5芽的增殖 

將愈傷組織轉移到MS+0.5mg/LBA+0.25mg/LIBA的培養基上，在此條件下兩種愈傷組織都可形成芽，但瘤狀愈傷組織多產生叢生型芽，不能抽莖和展葉顆粒狀愈傷組織形成單生型芽、芽多而密集、能抽莖和展葉。 

6生根苗的誘導 

當苗高2~3cm時，即可進行生根的誘導，一般一個500ml的三角瓶有400~600 

個芽條，能夠做生根的有效芽為30~60條，切取健壯的芽條轉移到White+0.2~1mg/LIBA+40mg/L，腺嘌呤+2%蔗糖或White+0.5mg/LIBA+4%蔗糖的生根培養基上進行培養，在室內散射光照條件，光照強度為2000~3000lx下，1~2周即開始發根，然后利用較強的自然散射光照光照強度為3000~5000lx進行培養10天左右，即可在苗的基部產生根而形成完整植株，一般發根率可達80%以上。 

2胚狀體的誘導和生長 

第一取無菌種子或無菌發芽后的苗段接種在B5H或改良H成分為NH4NO348.8mg/LKNO341.6mg/L其余的與B5的成分相同，加0.8~1.0mg/LKIN+2mg/L~4mg/L2.4-D+4%~5%蔗糖的固體培養基上，放在28氣溫環境和12小時光照下培養3~4天可產生愈傷組織，經20余天迅速增殖成紅里帶白色的愈傷組織。 

第二把上述愈傷組織及時移到H或改良H+0.2~1.0mg/LBA+0.5mg/LNAA+3%~5%蔗糖的固體培養基上,在光和28下培養，這時愈傷組織增殖速度減慢培養1~2周，逐漸呈粉紅色、表面光滑、結構致密、生機勃勃、再經3~6周培養愈傷組織表面更光滑，呈紫紅色顆粒狀，它就是胚性細胞團，從中可分化出許多胚狀體。 

第三把這些細胞團接種在H或改良H+0.2mg/LBA+0.5mg/LNAA+3%~5%蔗糖的培養基上，培養約10~30天可長出大量綠苗、但發根少、因此把它移入H或改良H+0.5mg/L~1.0mg/LIBA+3%蔗糖的固體培養基上在28和光下培養6~8天，便會長成根系發達的完整苗木。 

第四桉樹胚性細胞團可以較長期繼代培養而不喪失分化能力但愈傷組織繼代三次就會喪失分化能力繼代用的培養基仍為前述的分化培養基繼代時的胚性細胞團的大小,以0.1~0.2cm3為宜繼代周期為15~30天以20天左右最佳。 

3組培幼苗的移植 

桉樹組培苗經過誘導生根成苗其木質化程度還非常低瓶苗從無菌，光照、溫度恒定、濕度飽和的人工控制培養條件下轉入有菌、光、溫、濕不易控制的外界環境時，這個過程使幼苗自身葉片的光合能力和根的主動吸收能力逐漸增強，葉片表面的保護層也逐漸形成，這時幼苗才算完成了從異養到自養的轉變過程，因此，組培幼苗的移植必須按一定程序逐步進行。瓶苗發根率達80%以上時可移到室外在自然光下再培養6~10天，當小苗充分木質化，葉片舒展、葉色濃綠、莖軸、根系伸長時即可移栽出瓶外，育苗容器與 

基質配比與扦插苗培育相同，移栽前用0.15%~0.3%的高錳酸鉀溶液進行基質消毒,倒出培養基，小心洗去殘留在根上的培養基，并截去過長的根，保留2cm左右用0.1%的殺菌劑進行小苗消毒處理，根部再經IBA生根激素溶液處理后移入育苗基質中，置于育苗架上在70%遮光度的蔭棚內培育25~30天移植初期要覆蓋塑料薄膜保溫保濕，等小苗高3cm生長穩定后即可進行露天煉苗當小苗長至15~20cm時可以出圃造林或用作扦插母株。 

同時在移栽過程中幼苗抗逆性差極易感霉菌死亡因此在高溫高濕的溫室或覆蓋塑料薄膜的苗床上培育移植苗時，要注意溫室或苗床的通透性，每周用0.1%的多菌靈等殺菌劑噴一次消毒滅菌。